Saggio immuno-enzimatico
Riconoscimento antigene-anticorpo specifico con quantificazione tramite reazione enzimatica colorimetrica.
LOQ tipico
0,1 µg/L (microcistine)
Range tipico
da 0,05 µg/L a 50 µg/L
Norma principale
ISO 20179:2005 (microcistine in HPLC, ELISA come screening)
Parametri target
Principio fisico-chimico
L'ELISA si basa sulla reazione antigene-anticorpo. In formato competitivo, l'analita libero compete con un coniugato analita-enzima per i siti di legame di un anticorpo immobilizzato sulla piastra. Dopo lavaggio si aggiunge il substrato cromogeno (TMB) e si misura l'assorbanza a 450 nm; il segnale è inversamente proporzionale alla concentrazione di analita.
Strumentazione
Lettore di micropiastre 96-well, lavatore automatico, incubatore termostatato, pipettatore multicanale. Kit commerciali pronti all'uso (Abraxis, Beacon, Romer).
Preparazione del campione
Per le microcistine il campione deve essere lisato (congelamento-scongelamento) per liberare le tossine intracellulari, poi filtrato a 0,45 µm. La diluizione iniziale dipende dal range del kit.
Calibrazione e validazione
Calibrazione con 6 standard inclusi nel kit (tipicamente 0,1-2 µg/L). Curva sigmoidea con linearizzazione logit-log. Controllo positivo e negativo in ogni piastra. Verifica della cross-reattività dichiarata dal produttore.
Limiti di quantificazione e rilevabilità
Per microcistine il LOQ è 0,1 µg/L (limite WHO 1 µg/L). Per glifosato e atrazina LOQ di 0,05 µg/L. Si tratta di valori adeguati allo screening, ma i positivi vanno confermati con LC-MS/MS.
Norme di riferimento
EPA 546 specifica l'uso dell'ELISA per microcistine in acque potabili come metodo screening; la conferma e la quantificazione di routine si fa con HPLC-DAD o LC-MS/MS secondo ISO 20179. Le linee guida WHO 2020 inquadrano la cianotossine in acque destinate al consumo umano e ricreative.
Quando si usa
ELISA è indicata per screening rapidi durante fioriture cianobatteriche estive in invasi e laghi, per controllo di routine in impianti di potabilizzazione, per studi di prevalenza su grandi numeri di campioni.
Quando NON si usa
Non sostituisce LC-MS/MS per la quantificazione e l'identificazione di singoli congeneri (oltre 80 microcistine note). Non è adatta per monitoraggi normativi richiedenti tracciabilità su singolo isomero.
Confronto con metodi alternativi
Rispetto a LC-MS/MS, ELISA è 5-10 volte più economica e più rapida ma fornisce solo la concentrazione totale equivalente di tossine cross-reattive. È un complemento ideale a LC-MS/MS in workflow tiered.
Parametri, LOQ e limiti di legge
| Parametro | LOQ tipico | Limite di legge |
|---|---|---|
| Microcistine totali | 0,1 µg/L | 1 µg/L (WHO; D.Lgs. 18/2023) |
| Glifosato (screening) | 0,05 µg/L | 0,1 µg/L |
| Bisfenolo A | 0,1 µg/L | 2,5 µg/L |
| Atrazina | 0,05 µg/L | 0,1 µg/L |
Vantaggi
- Tempo di risposta breve (3-4 ore)
- Costo per analisi molto contenuto (10-25 EUR)
- Metodo di screening adatto a grandi campagne
Limiti
- Cross-reattività con analoghi strutturali
- Richiede conferma con metodo cromatografico per valori positivi
- Range di linearità ristretto
Costi orientativi
15-30 EUR per analisi screening microcistine totali
I costi sono indicativi e variano in funzione del numero di analiti, della matrice e dell'urgenza richiesta.
Norme di riferimento
- ISO 20179:2005 (microcistine in HPLC, ELISA come screening)
- EPA 546 (microcistine ELISA)
- Linee guida WHO 2020 (cianotossine)
Domande correlate
Ultimo aggiornamento: 2026-05-03