Codice: UNI EN ISO 11731:2017
La UNI EN ISO 11731:2017 (Qualità dell'acqua — Enumerazione di Legionella) è la norma tecnica internazionale per il conteggio di Legionella nelle acque, metodo colturale di riferimento per le verifiche obbligatorie, che sostituisce e aggiorna le versioni del 1998 e del 2008.
Elaborata dal comitato ISO/TC 147/SC 4 (metodi microbiologici). L'edizione 1998 riguardava le acque degli impianti tecnologici, la specifica ISO/TS 11731-2:2008 le acque potabili a bassa carica; la revisione 2017 le riunisce in un unico metodo valido per tutte le matrici acquose, recepito in Italia come UNI EN ISO 11731.
Filtrazione su membrana, pretrattamenti termico/acido, semina su terreni BCYE e selettivi (GVPC), incubazione 7-10 giorni a 36 ± 2 °C.
Il campione si concentra per filtrazione (membrane in policarbonato da 0,2 o 0,45 µm in base alla carica attesa) o per centrifugazione. Il concentrato si divide in tre aliquote: una scaldata a 50 °C per 30 minuti, una trattata con tampone acido a pH 2,2 per pochi minuti e una non trattata, così da avere almeno una piastra leggibile anche in presenza di molta flora interferente. L'identificazione di specie e sierogruppo può avvenire con antisieri, MALDI-TOF o PCR.
Conferma morfologica, biochimica e sierologica dei sospetti; identificazione della specie e sierogruppo.
Tipicamente 10 UFC/L per acqua sanitaria; 50 UFC/L per matrici complesse.
Risultato in UFC/L con indicazione del sierogruppo e del limite di rilevabilità.
La ISO 12869:2019 quantifica il DNA di Legionella in qPCR in poche ore, ma non distingue cellule vive e morte e può quindi sovrastimare la carica, soprattutto subito dopo una bonifica termica o chimica. Le Linee guida 2015 la considerano utile per screening rapidi o indagini dopo un caso sospetto; per il monitoraggio di routine e la verifica dell'efficacia delle bonifiche il riferimento resta il colturale UNI EN ISO 11731, che conta solo le cellule vitali.
Le Linee guida per la prevenzione ed il controllo della legionellosi (Conferenza Stato-Regioni, 7 maggio 2015) impostano il controllo sulla valutazione e gestione del rischio, con soglie di intervento differenziate per tipologia di struttura e obiettivo di assenza di Legionella nei reparti che ospitano pazienti ad alto rischio. Il D.Lgs. 18/2023 ha introdotto il monitoraggio della Legionella nei sistemi di distribuzione interna degli edifici prioritari, con un piano di campionamento su acqua calda e fredda nei punti più rappresentativi.
In base alla valutazione del rischio i campionamenti sono in genere semestrali o annuali, con prelievi aggiuntivi dopo manutenzioni straordinarie, riaperture dopo chiusure stagionali prolungate o segnalazioni di casi di legionellosi tra gli ospiti.
Lettura guidata degli articoli e allegati principali, con sintesi del testo ufficiale e commento pratico per capire cosa cambia davvero per la tua struttura.
Specifica i metodi colturali per l’isolamento di Legionella e la stima della carica in campioni d’acqua, applicabili a qualsiasi tipo di acqua e a matrici correlate come biofilm e sedimenti.
Definisce dove si applica il metodo: non solo acqua sanitaria, ma anche matrici complesse, utile quando il prelievo riguarda torri o serbatoi.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, Sezione 1 (Scopo e campo di applicazione)
Prevede contenitori sterili con tiosolfato per neutralizzare i biocidi residui (es. cloro) e condizioni di trasporto e conservazione che preservino la vitalità dei batteri.
Il prelievo corretto è metà del risultato: senza neutralizzazione del cloro o con trasporto scorretto si ottengono falsi negativi. Di norma si raccoglie 1 litro per punto, si misura la temperatura dell'acqua al prelievo e si annotano cloro residuo e punto campionato. Il prelievo può essere a flusso, dopo 1-2 minuti di scorrimento, per valutare l'acqua erogata dalla rete, oppure a stagnazione, senza scorrimento, per valutare tubazione e terminale; il campionamento microbiologico segue la UNI EN ISO 19458.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Campionamento (prelievo e conservazione)
Per migliorare la sensibilità il campione viene concentrato per filtrazione su membrana, con eluizione o deposizione diretta della membrana sul terreno.
La concentrazione abbassa il limite di rilevabilità: è ciò che permette di trovare basse cariche di Legionella in acqua relativamente pulita.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Concentrazione (filtrazione su membrana)
Descrive i pretrattamenti termico e acido per ridurre la flora batterica interferente e favorire la crescita selettiva delle Legionella.
Servono ad abbattere i contaminanti che maschererebbero le colonie: passaggio chiave per la leggibilità delle piastre.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Pretrattamenti (termico e acido)
Prevede la semina su terreno BCYE e terreni selettivi (es. GVPC), con incubazione a circa 36 ± 2 °C per 7-10 giorni in ambiente umido e letture seriate.
Spiega perché il referto richiede 10-12 giorni: l’incubazione colturale non è comprimibile, a differenza dei test rapidi di screening.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Semina e incubazione (terreni BCYE/GVPC)
Le colonie sospette sono confermate per crescita cisteina-dipendente e identificate per specie e sierogruppo (incluso L. pneumophila sierogruppo 1).
La conferma evita falsi positivi e distingue il sierogruppo 1, il più virulento: dato decisivo per la valutazione del rischio.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Conferma e identificazione
Il risultato è espresso come UFC per litro (o per 100 mL), con indicazione del limite di rilevabilità e del sierogruppo identificato.
Le UFC/L del referto sono i numeri che confronti con le soglie di azione delle Linee Guida 2015 per decidere se bonificare.
Fonte: UNI EN ISO 11731:2017, § Espressione dei risultati
Interpreta il refertoUsa contenitori sterili con tiosolfato per neutralizzare i biocidi residui come il cloro e garantisci condizioni di trasporto e conservazione che preservino la vitalità dei batteri.
Migliora la sensibilità concentrando il campione per filtrazione su membrana, con eluizione o deposizione diretta della membrana sul terreno.
Riduci la flora batterica interferente con i pretrattamenti termico e acido per favorire la crescita selettiva delle Legionella.
Semina su terreno BCYE e terreni selettivi, incuba a circa 36 ± 2 °C per 7-10 giorni e conferma le colonie sospette identificando specie e sierogruppo.
Esprimi il risultato come UFC per litro (o per 100 mL) indicando il limite di rilevabilità e il sierogruppo, da confrontare con le soglie delle Linee Guida 2015.
La qPCR (ISO 12869) è utile come screening rapido, ma rileva anche il DNA di cellule non vitali e può sovrastimare la carica dopo una bonifica: per la conformità e per verificare le bonifiche il riferimento resta il metodo colturale UNI EN ISO 11731.
Rispondono a domande diverse: il prelievo a flusso, dopo 1-2 minuti di scorrimento, descrive l'acqua distribuita dalla rete; quello a stagnazione, senza scorrimento, descrive lo stato di tubazione e terminale. La scelta dipende dal piano di campionamento definito con la valutazione del rischio.
In genere ogni sei o dodici mesi secondo la valutazione del rischio della struttura, con controlli aggiuntivi dopo manutenzioni straordinarie, lunghe chiusure stagionali o segnalazioni di casi.
È opportuno scegliere un laboratorio qualificato che applichi la UNI EN ISO 11731 con metodi validati conformi a norme tecniche; il referto è utilizzabile per pratiche con ASL e autorità competenti (ammissibilità valutata dall’autorità competente).
In genere 7-10 giorni di incubazione, più conferma. Il referto è disponibile in circa 10-12 giorni lavorativi.
Almeno Legionella pneumophila sierogruppo 1 (più virulento) e altri sierogruppi 2-14, oltre a Legionella spp. non pneumophila.
Sì, deve essere riportata nel referto secondo le buone pratiche tecniche del metodo.
123Acqua è un laboratorio qualificato e applica la UNI EN ISO 11731:2017 per le analisi Legionella, con refertazione completa di sierogruppi.
Analisi LegionellaScheda aggiornata il .